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2023-06-091569 次浏览
细胞培养常见七大误区

细胞培养过程中时常会出现这样或那样的问题,别小看细胞培养,里面却蕴含着大学问.通过与使用者沟通你会发现了很多可以避免的问题发生,下面对细胞培养过程中存在的几大误区做详细解析。

 

误区一

XX实验室培养XX细胞用的就是这个培养基,我用一样的就可以

 

?选择培养基没有一定的标准,有几点建议可供参考:

 

首选:建立该细胞株所用的培养基

 

参考:文献

 

尝试:实验室常用的培养基

 

按需:根据细胞株的特点、实验的需要来选择

 

最客观:用多种培养基培养,根据实际效果选择,但较繁琐

 

误区二

长期使用抗生素,以对抗污染

 

? 细胞培养时不应常规使用抗生素

 

? 连续使用抗生素会促进抗生素耐药性细胞株的产生,导致轻度污染持续存在,一旦将抗生素从培养基中去除,这种轻度污染最终将发展成大规模污染

 

? 连续使用抗生素会掩盖支原体感染及其他隐性污染

 

? 有些抗生素会与细胞发生交叉反应,干扰您研究的细胞过程

 

误区三

培养基中的谷氨酰胺容易降解,需要不断补充

 

如果正确使用,一般不需要补加

 

? 4℃避光保存

 

? 分装,不要反复预热

 

? 含有谷氨酰胺的培养基,开封后应尽快用完

 

误区四

培养基误存于-20℃,溶解后继续使用

 

? 在-20℃下,培养基中的盐容易析出,培养基再次融化后,有的盐可能无法重新溶解,从而导致培养基营养成分和渗透压改变,培养细胞时,容易细胞破裂而死亡

 

? 建议丢弃该培养基,重新购买新的培养基用于细胞培养

 

误区五

常见细胞系无需检测血清批次,可以直接切换

 

? 血清来源于动物,组成成分有1000种左右,每个批号的组分和组分含量都是不确定的,批间差异是可能存在的

 

? 如果某一个批次血清使用效果较好,记住批号,订货的时候给予说明

 

? 如果需要换不同批号的血清,提前查询COA文件,寻找测试结果接近的批次

 

? 先订购一瓶试用,试用成功之后再大量订购该批号血清

 

误区六

血清灭活以后使用效果更好

 

? 血热灭活的血清对大多数细胞而言是不需要的,高温处理可能影响了血清的品质,造成细胞生长速率的降低,经过热处理的血清,沉淀物增多

 

? 灭活补体系统

 

补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞,刺激平滑肌收缩等

 

? 在免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清

 

血清必须热灭活?

热灭活是指将血清于56℃处理30分钟,灭活血清中的补体。

实验表明,经热灭活的血清对细胞生长可能仅有微小促进或完全没有任何作用,甚至通常因高温处理而损失掉血清中部分营养成分,从而影响血清质量,造成细胞生长速率降低。热灭活过程中因局部温度过高、摇晃不均匀或灭活时间过长,都会造成血清品质下降。且经热灭活后的血清会增加发生蛋白沉淀概率,这些沉淀物在倒置显微镜下观察像是“小黑点”,通常会让研究者误以为是血清遭受污染。

 

因此,若非必须血清不需要做热灭活,而少数对补体敏感的细胞实验,如某些免疫学实验或腺病毒包装等,可酌情对血清进行热灭活操作。

 

热灭活方法示例

1.热灭活前须先摇匀解冻后的血清并恢复至室温;

2.取部分摇匀血清置于50ml离心管中,并准备同规格对照管一个;

3.对照管内加入血清等体积水;

4.对照管内插入温度计进行温度预试,当温度达到56℃时将恢复至室温的血清放入水浴锅30min; 

5.灭活过程中需要每隔5min轻轻晃动摇匀,以保证温度均一。

 

误区七

原代细胞的培养及操作与传代细胞一样

 

? 与细胞系不同,原代细胞具有有限的扩增能力。我们建议尽早使用原代细胞进行实验以防止遗传漂移。

 

? 当细胞传代时,使用低浓度的胰蛋白酶并在显微镜下密切监测细胞。此外,记得在胰蛋白酶消化后完全中和细胞中的胰酶,因为任何活性的胰蛋白酶都将损伤细胞。

 

? 通常我们不推荐重新冻存原代细胞,因为这可以促进细胞衰老和/或导致功能变化。原代细胞非常敏感,重新冻结可能导致细胞死亡或损伤。

 

? 原代细胞对解冻过程非常敏感,因此将小瓶置于37℃水浴中,保持并轻轻旋转直到内容物刚刚解冻是很重要的。然后应立即从水浴中取出小瓶,并转移到无菌操作台。确保您的培养瓶在解冻前已经准备就绪,以便可以立即用于接种细胞,并置于培养箱中。

 

? 我们不建议在解冻后离心细胞,因为离心程序比少量的DMSO残留更有害。记住,在恢复原代细胞后的第二天更换培养基以去除任何残留的DMSO。